Cygnus公司研發(fā)生産的系列CHO細胞宿主蛋白殘留檢測試劑盒,靈敏度高,檢測範圍廣泛,有第一代到第三代産品可供選擇。
CHO細胞即中國(guó)倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary),該細胞具有不死性,可以傳代百代以上,是目前生物工程上廣泛培養的細胞。全世界批準正式應用于人類疾病治療或疾病預防的基因工程産品約有三十多種(zhǒng),其中隻有一種(zhǒng)(乙肝疫苗)是由酵母菌生産的,其餘所有産品都(dōu)是由CHO細胞和大腸杆菌生産的,大腸杆菌不能(néng)形成(chéng)有活性的二聚體(如白介素2),也不具有糖基化的功能(néng)(如EPO),而CHO卻具有如上的功能(néng),因此CHO成(chéng)爲表達複雜生物大分子的理想宿主。另外CHO細胞在基因工程使用中還(hái)有一個優點,該細胞屬于成(chéng)纖維細胞(fibroblast),是一種(zhǒng)非分泌型細胞,它本身很少分泌CHO内源蛋白,因而檢測起(qǐ)來很困難。
CHO檢測是一個雙位點酶聯免疫檢測。樣(yàng)本中包含的CHO HCPs蛋白與标記有抗-CHO抗體的辣根過(guò)氧化物酶同時(shí)反應,反應發(fā)生在之前塗有一層吸附性抗-CHO蛋白抗體的微量滴定闆中進(jìn)行。免疫反應構成(chéng)爲夾層式結構:固相抗休-HCP-酶标記抗體。反應結束後(hòu)清洗微量滴定闆去除未結合反應物。添加TMB作用底物反應。微量滴定闆讀數器上測定水解物濃度,水解物濃度與CHO HCPs蛋白濃度成(chéng)比例。用提供的标準液繪制标準曲線,根據讀數可以計算出CHO HCPs蛋白含量。
Cygnus 美國(guó)賽納斯科技公司是一家專爲基因工程生物制藥企業、疫苗生産企業、學(xué)術研究、生物制藥研發(fā)部門和QA部門(品質保證部門)提供宿主細胞蛋白殘留檢測和生物制藥工程中污染物的殘留檢測技術和産品的世界著名的美國(guó)生物技術高科技公司。美國(guó)Cygnus公司提供了種(zhǒng)類廣泛而靈敏度極高的一系列用于檢測宿主蛋白殘留物的HCP ELISA試劑盒和BC ELISA試劑盒等産品,在尋求最佳純化效果和日常質量控制過(guò)程中使用美國(guó)Cygnus公司的産品可以很方便地得到理想的實驗結果。
檢測試劑盒使用了較之前代有更廣泛反應性的新一代抗體,此外還(hái)進(jìn)行了許多提升HCP檢測能(néng)力的其它改進(jìn)。新試劑盒有更高的靈敏性,可以從CHO重組表達抗體或其它治療性蛋白中檢測100ppb級的HCP。它已被(bèi)廣泛應用于大量種(zhǒng)藥物和中間樣(yàng)本的檢測。這(zhè)些數據表明,該試劑盒是一個普适型産品,而非階段性的過(guò)渡品,在大多數情況下均可以直接應用,不需要再進(jìn)行針對(duì)性開(kāi)發(fā)。該抗體使用傳統的免疫印迹法和已證明更好(hǎo)的、被(bèi)我們稱作的新方法進(jìn)行反應活力評估。這(zhè)種(zhǒng)法證明,在裂解液或條件培養基中,我們的抗體可以與來自細胞系的超過(guò)種(zhǒng)宿主蛋白發(fā)生免疫反應,這(zhè)種(zhǒng)HCP蛋白超過(guò)了現有Elisa法能(néng)檢測到的CHO細胞總蛋白重量的98%,因此該抗體可以解決檢測中漏掉某些重要HCP的擔憂。新款試劑盒也比老試劑盒更穩定,表現在受樣(yàng)本基質的幹擾更少,稀釋液的線性關系更清晰。如果F015和CM015試劑盒無法滿足您的全部需要,或者您正在考慮對(duì)生産具體過(guò)程進(jìn)行全面(miàn)分析,我們建議您嘗試使用第三代檢測試劑盒F550。