産品介紹:
利用我們的創新和專有的脂質體共轭結合技術,專門設計和配制了LipoD293™ (Ver. II)轉染試劑,它添加了專有的增強劑促進(jìn)HEK293細胞和其它的哺乳動物細胞的轉染。作爲DNA轉染試劑的第二代脂質體産品,對(duì)HEK293相關細胞和其它哺乳動物細胞, LipoD293™ (Ver. II)轉染試劑提供了極高的轉染效率,并且細胞毒性 低。LipoD293™ (Ver. II)轉染試劑,通過(guò)加入轉染增強肽的方式,使基因轉 染效率提高了3~4倍。LipoD293™(Ver. II)轉染試劑,1.0ml,能(néng)在24孔闆中足夠完成(chéng)666次轉染,在6孔闆中足夠完成(chéng)333次轉染。
圖 1. 示意圖說(shuō)明LipoD293™轉染試劑(升級版)增強轉染的原理。
産品特點:
- 難轉染細胞的最佳選擇
- 産生高滴度的病毒
- 對(duì)長(cháng)DNA片段同樣(yàng)有效(最長(cháng)可達180kb)
- 對(duì)懸浮293細胞同樣(yàng)有效(例如293F, 293H等)
- 産生高 水平的重組蛋白
- 血清和抗體不影響轉染效率
- 對(duì)單DNA和多DNA片段的共轉染特别有效
- 物美價廉
儲存條件:
40C儲存。若儲藏合适,産品的穩定性能(néng)保持12個月以上。
LipoD293™體外DNA轉染試劑(升級版)與市場主導品牌産品轉染效率的比較。
LipoD293™試劑(升級版)、lipofectamine 2000 (L2K)和Fugene HD對(duì)HepG2細胞轉染效率的比較。右圖:使用以上轉染試劑將(jiāng)GFP的cDNA (pEGFP-N3)按照生産商的提供的轉染步驟轉染到HepG2細胞 (在膠原預處理的培養皿中培養)。在轉染48小時(shí)之後(hòu),用流式細胞儀檢測GFP陽性細胞(%)和熒光強度。左圖:血清和抗生素存在的條件下能(néng)提高LipoD293試劑(升級版)對(duì)在HepG2細胞的轉染效率。通過(guò)三種(zhǒng)不同的條件下轉染HepG2細胞(生長(cháng)在膠原處理的培養皿上) ---無血清和抗生素,10%血清和抗生素的存在,轉染5小時(shí)後(hòu)換液和不換液。
LipoD293™試劑(升級版),Lipofectamine 2000 (L2K), TransIT和Fugene 6對(duì)CHO細胞轉染效率的比較。右圖:使用以上轉染試劑將(jiāng)編碼熒光素酶蛋白的cDNA (phRL-CMV)和綠色熒光蛋白GFP的cDNA按照生産商的提供的轉染步驟分别轉染到CHO細胞。在轉染24小時(shí)後(hòu),熒光素酶的活性使用Beckman公司的化學(xué)發(fā)光監測器測定;GFP陽性細胞率使用BD公司的FACS檢測。左圖:LipoD293試劑(升級版)和Lipofecatmine 2000 (L2K), TransIT以及Fugene 6的價格比較(美元/1000微升)。所有的價格是從生産制造商的網站上收集的。
LipoD293™試劑(升級版)和Lipofectamine 2000 (L2K)對(duì)在難轉染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)的轉染效率的比較。制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用LipoD293™試劑(左圖)和Lipofecatmine 2000(L2K,右圖)分别將(jiāng)GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生産制造商的轉染操作步轉染至該細胞。轉染24小時(shí)後(hòu),用尼康Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉染效率。上面(miàn)的圖片由芝加哥大學(xué)的肺和重症護理系的Nickolai Dulin博士友情提供的。
LipoD293™試劑和Fugene HD對(duì)難轉染細胞LNCap細胞轉染效率的比較。LNCap細胞的培養和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,與pBabe-hygro-SSeCKs (1.5ug)和pEGFP-N3 (1:1,共1.0 微克)共轉染(6孔闆中每孔的量),并用 LipoD293™試劑(左圖)和Fugene HD (右圖)分别按照生産制造商的科學(xué)實驗步驟進(jìn)行轉染。轉染24小時(shí)後(hòu),用尼康Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉染效率。上面(miàn)的圖片由羅斯威爾公園癌症研究所(Roswell Cancer Institute)的Lyn Gao博士友情提供的。
LipoD293™試劑對(duì)難轉染細胞像HepG2和SaoS-2上出色的轉染效率。在血清和抗生素的存在下,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分别轉染達到95%的細胞融合。轉染48小時(shí)後(hòu),分别通過(guò)Zeiss 510激光共聚焦顯微鏡和 β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。
LipoD293™試劑和 293fectin對(duì)HEK293細胞轉染效率的比較。用LipoD293™體外DNA轉染試劑(Ver. II)(上圖)和受歡迎的品牌産品Invitrogen公司的293fectin™(下圖)轉染pEGFP-C1質粒到HEK293細胞中。轉染24小時(shí)後(hòu),細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成(chéng)像圖(左側)和熒光成(chéng)像圖(右側)。
LipoD293™試劑和 293fectin,Xfect和Fugene 6轉染試劑對(duì)懸浮HEK293F産生蛋白質效率的比較。30毫升的293F細胞分别使用LipoD293™試劑、293fectin、Xfect和Fugene 6等轉染試劑按照生産商的标準轉染步驟將(jiāng)pEGFP-6xHis質粒導入細胞表達,用量爲LipoD293™試劑,20微克,所有其他三種(zhǒng)轉染試劑均使用30微克質粒DNA。轉染48小時(shí)後(hòu),使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進(jìn)行成(chéng)像(左側四幅圖),A:LipoD293; B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene 6. 帶有6xHis标記的 GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術實現分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進(jìn)行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道(dào)1爲LipoD293293、道(dào)2爲标準蛋白分子、道(dào)3爲Xfect、道(dào)4爲293fectin和道(dào)5爲Fugene 6。這(zhè)四種(zhǒng)轉染試劑産生蛋白質的效率被(bèi)進(jìn)一步定量(見右下圖F)。
LipoD293™試劑(升級版)和Lipofecatmine LTX (LTX)産生慢病毒的比較。通過(guò)LipoD293™試劑(升級版)和Lipofectamine LTX (LTX)試劑將(jiāng)三個cDNAs共轉染進(jìn)293T細胞。一個GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被(bèi)用來測定慢病毒的滴度。在24孔闆中每孔加入1x10^5 293T細胞,其次是分别添加不同量的慢定都(dōu)上清液,1 微升(上圖)和10微升(下圖)。5天後(hòu),細胞通過(guò)流式細胞儀檢測。右上角的數字表明轉導的細胞的百分比來測定慢病毒的滴度。由LipoD293™ and LTX産生的慢病毒的滴度被(bèi)量化,分爲是8x10^6和3x10^6tu/ml 。